Savoir Faire
Compétences techniques
La thermophorèse, ou effet Soret désigne un phénomène basé sur la mise en mouvement de particules ou de molécules soumises à un gradient de température. La thermophorèse d’un composé varie en fonction de sa taille, de sa charge ou de son niveau de solvatation selon les termes de l’équation de Soret. Lors d’une interaction spécifique entre deux molécules, une au moins de ces propriétés est affectée (taille, charge, solvatation) et modifie en conséquence la courbe de thermophorèse.
Basée sur le principe de la thermophorèse, la Thermophorése à micro échelle ou MicroScaleThermophoresis (MST) permet la mise en évidence d’interactions moléculaires entre biomolécules de natures physico-chimiques différentes, purifiées ou non.
Détection des variations de la mobilité d’une molécule fluorescente (naturellement ou par marquage fluorescent) soumise à un micro-gradient de température établi dans un capillaire, en présence de concentrations croissantes d’un interactant spécifique.
L’exploitation des propriétés thermophorétiques d’un composé pour des études d’interactions moléculaires constitue une approche innovante.
Sur la plateforme PCBI, nous disposons du Monotih NT.115 de Nanotemper pour effectuer ces analyses.
La nanoDSF est la méthode de choix pour une mesure rapide et précise de la stabilité des protéines. Elle détecte les changements de fluorescence du tryptophane, un acide aminé hydrophobe présent dans les protéines. Cette fluorescence est fortement dépendante de l’environnement proche de cet acide aminé. Dans une protéine présentant une conformation correcte, il est localisé dans le cœur hydrophobe de la protéine et protégé de l’environnement aqueux du solvant. Au cours du dépliement, le tryptophane devient exposé, ce qui altère sa fluorescence. Le dépliement des protéines peut ainsi être enregistré dans une véritable approche sans marquage préalable.
Sur la plateforme PCBI, nous disposons du TYCHO TM NT.6 de Nanotemper pour effectuer ces analyses.
Les protéines sont des éléments essentiels. Les protéines recombinantes sont, des protéines (sécrétées, nucléaires, membranaires) produites en laboratoire par une bactérie ou par des cellules eucaryotes (Levure, cellules d’insectes ou mammifères), dont le matériel génétique a été modifié.
Après purification, ces protéines peuvent être utilisées pour comprendre les mécanismes cellulaires complexes ou en thérapies.
La plateforme PCBI, dispose d'une banque de cellules (CHO, HEK293...) ainsi que d'un accès à un laboratoire de type L2 afin d'effectuer de la culture cellulaire et de la production de protéine recombinantes. Les protéines recombinantes produites peuvent être utilisées dans le cadre d'études d'interactions par MST (avec un ligand, avec une autre protéine ou avec une petite molécule).
